[论文标签]（免费论文、免费毕业论文、医学论文写作方法论文、经管论文、环化论文、计信论文、教学论文等）
【论文关键词】方法；检测；性染色质；比较
【论文摘要】目的：探讨改进检测X染色质的方法。方法：以在校学生的口腔黏膜细胞为材料，分别用石炭酸复红染液直接涂片法和吉姆萨染液扣染法显示X染色质。结果：石炭酸复红染液染色直接涂片法操作简单，用时短，阳性检测率低；吉姆萨染液扣染法操作稍复杂，用时稍长，阳性检出率高，但由于课堂时间限制，中职学生的课堂教学中不易推广。讨论：应用改进的人类性染色质检测方法，可以准确检出性染色质。
中等职校《医学生物学》实验教学中一直沿用石炭酸复红直接涂片法（以下简称直接涂片法），阳性率不太理想，故近年借鉴改良后的吉姆萨染液扣染法（以下简称扣染法），阳性率明显提高，现将两种方法比较如下。
1 实验材料及方法
1．1 材料：选择本校一年级汉族女生（16~20岁）20例，取其颊部口腔黏膜细胞为标本。
1．1．1 染色液配制：石炭酸复红染液的配制，A液：碱性复红(basic fuchsin) 0．3 g，95%酒精10 ml，B液：石炭酸5．0 g、蒸馏水95 ml；将碱性复红在研钵中研磨后，逐渐加入95%酒精，继续研磨使其溶解，配成A液。石炭酸溶解于水中，配成B液，混合A液及B液即成。通常可将此混合液稀释5~10倍使用，稀释液易变质失效，一次不宜多配[1]。
1．1．2 吉姆萨染液的配制：将吉姆萨粉末1g先溶于少量甘油，在研钵内研磨30 min以上，至看不见颗粒为止，再将全部(66 ml)剩余甘油倒入，于56 ℃温箱内保温2 h。然后再加入甲醇(66 ml)，搅匀后保存于棕色瓶中。母液配制后放入冰箱可长期保存，一般刚配制的母液染色效果欠佳，保存时间越长越好。临用时用pH 6.8的磷酸盐缓冲液稀释10倍。固定液(甲醇:冰醋酸=3:1)，用时现配[2]。
1．1．3 实验所需其他器材：显微镜、载玻片、盖玻片、烧杯、量筒、吸管、牙签、染色缸、擦镜纸、吸水纸、离心机以及盐酸试剂等。
1．2 方法
1．2．1 石炭酸复红染色直接涂片法：用牙签在女性口腔黏膜颊部刮取上皮细胞，均匀涂布于(只能向一个方向涂抹，尽量避免细胞被破坏)载玻片中央部位。应当把细胞核界限清楚的深层上皮细胞用作这些涂片。稍干后，放入3:1的甲醛、冰醋酸固定液中固定30 min。固定的标本经水冲洗后，在石炭酸复红染液中染5~10 min，再在95％乙醇中分色约半分钟，最后用中性树胶封片、镜检。
1．2．2 吉姆萨扣染法：受检查者用清水漱口后，用牙签轻轻刮取两侧颊部内侧的黏膜，弃去第一次刮取到的黏膜细胞，在同一部位连续刮取数次，将刮取的细胞涮入装有生理盐水3 ml的刻度离心管中，以1000 r/min离心10 min，弃上清液，加入1 mol/L盐酸3 ml，用吸管将细胞团轻轻打散，制成悬液，37℃解离20 min，以1 000 r/min离心10 min，弃上清液。加入新配制的卡诺固定液（甲醇:冰醋酸，V:V=3:1）3 ml，用吸管将细胞团轻轻打散，制成悬液，室温下固定10 min，再次打散细胞团后，继续固定20 min，离心前将细胞打散，以1 000 r/min离心10 min，弃上清液，根据细胞多少加0.1~0.2 ml新配制的卡诺固定液，将细胞打散，制成悬液，用吸管取细胞悬液，滴于冰水浸过的载玻片上，自然晾干后染色、镜检。
1．3 计数标准及方法：X染色质位于核膜内缘，是核内惟一浓染的、轮廓清楚的小体，呈小山丘形、扁平形或三角形、圆形等。形态相似但不依附于核膜内缘的不计数，凡核膜缺损、染色过深或细胞上有杂质附着，细胞核重叠等均不做计数；低倍镜下找到细胞集中而又均匀分散的细胞群，油镜下计数100个可计数细胞（可做为计数细胞的是细胞核较大，轮廓清楚完整，无缺损、皱褶，染色清晰。核质呈细网状或均匀的细颗粒状，无深染大颗粒及细菌污染），计算其中X染色质的阳性率。
2 结果
2．1 直接涂片法结果：制片时间短，约40 min，大多数个体细胞被浓染，且背景残留染液杂质较多，污染视野，减少了可计数细胞数量。个体细胞X染色质阳性率为12%~17％。在教学过程中由学生操作时，因主观原因致阳性检出率更低。 毕业论文搜集整理：毕业论文库-中国大学网
$False$
2．2 扣染法结果：染色时间较长，95分钟左右，镜下可见细胞轮廓拉清楚，胞核胞浆对比明显，核质均匀，细胞背景材料杂质少，X染色质形态清晰，每个个体X染色质阳性率在17%~20％。
3 讨论
X染色质检查可用于判断细胞中X染色体数目，以此鉴定性别及性染色体异常的遗传性疾病。与核型分析相比具有快速、操作简便，所需仪器简单等优点，是比核型分析优先考虑的方法：直接涂片法染色时间短，制片时间短染色过程不易掌控，细胞不是染色过深，就是细胞核与细胞质对比不明显，可能是由于染液浓度过高或是染色时间不适所造成；且背景残留较多杂质，直接涂片致使细胞不易完全分开，有重叠细胞团，由于固定液挥发还致细胞被破坏较多，导致镜检和统计困难。学生在实验课上操作时，制片过程更不够仔细等主观原因致以上情况更严重，阳性检出率更低，据统计为10%~13％。扣染法增加了细胞解离过程，促进细胞松软，能够使细胞充分松散，不重叠；在高倍镜下观察，核质均匀，细胞质与细胞核区分明显，易于统计；固定过程在离心管中进行，减少了固定液挥发而导致的细胞破坏，细胞保持完整，染色时间易于控制，该法还减少染液杂质残留于核内及周围。
参考文献：
[1] 樊祥岩，杨廷忠.医学遗传学基础[M].江苏：江苏科学技术出版社，1999.77.
[2] 王静颍，王 懿.医学遗传学基础[M].北京:科学出版社，2007.97. 毕业论文搜集整理：毕业论文库-中国大学网
|
